Invitrogen™ CyQUANT™ LDH and G6PD Cytotoxicity Assays

Descripción

CyQUANT cytotoxicity assays provide a simple and reliable method to assess chemical or cell-mediated cellular toxicity. The CyQUANT LDH Cytotoxicity Assays and the CyQUANT Cytotoxicity Assay (G6PD Release Assay) use colorimetric- or fluorescence-based detection to measure the release of cytosolic enzymes (LDH or G6PD) from damaged cells. These cytotoxicity assays are optimized for use on microplate readers and can be used for continuous monitoring of cell health over time since cell lysis is not required, making them versatile tools for high-throughput screening and drug discovery applications.

La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima citosólica presente en varios tipos de células diferentes que se libera en el medio de cultivo celular tras el daño a la membrana plasmática. El ensayo de citotoxicidad de LDH CyQUANT, fluorescencia, proporciona los reactivos para medir de forma precisa y cuantitativa esta LDH extracelular.

Las características del ensayo de citotoxicidad de LDH CyQUANT, fluorescencia, incluyen:
• Práctico: protocolo de ensayo de adición, mezcla y lectura para células adherentes y en suspensión, incluidos los modelos de células 3D
• Exactitud: proporciona una medición cuantitativa de la liberación de LDH
• Flexibilidad: ideal para la detección de alto rendimiento y permite controlar la citotoxicidad de la misma muestra a lo largo del tiempo
• Robusto: la formulación con resazurina altamente purificada provoca un amplio rango dinámico de ensayo

La LDH es una enzima citosólica presente en varios tipos de células diferentes y es un indicador bien establecido y fiable de la toxicidad celular. El daño de la membrana plasmática produce una liberación de LDH en el medio de cultivo celular circundante. Esta LDH extracelular puede cuantificarse mediante una reacción enzimática acoplada en la que la LDH cataliza la conversión de lactato de piruvato mediante la reducción de NAD+ en dinucleótido de nicotinamida (NADH). La diaforasa utiliza NADH para reducir la resazurina a resorufina, que se puede detectar mediante una excitación de 560 nm y emisión de 590 nm. El nivel de formación de resorufina es directamente proporcional a la cantidad de LDH que pasa al medio.

Como consecuencia de los procesos de síntesis y fabricación, todos los reactivos basados en la resazurina contienen una cantidad detectable de contaminación por resorufina. La cantidad de contaminación puede variar considerablemente entre las fuentes del material y las condiciones de fabricación, lo que contribuye a las diferencias en la fluorescencia de fondo detectable. Lo que es más importante, la resorufina contaminante reduce la relación señal-fondo y el rango dinámico del ensayo. Se desarrolló un proceso innovador que elimina la resorufina contaminante, lo que produjo la resazurina de gran pureza utilizada en el ensayo de citotoxicidad de LDH CyQUANT™, fluorescencia.

El ensayo de citotoxicidad de LHD CyQUANT, fluorescencia, proporciona los reactivos necesarios para la cuantificación simple y fiable de la citotoxicidad celular basada en fluorescencia. El kit se puede utilizar con diferentes tipos de células, incluidos los modelos de células 3D, para medir la citotoxicidad mediada por compuestos químicos, así como la citotoxicidad mediada por células. Dado que la LDH en el medio es el indicador de citotoxicidad celular, el ensayo puede utilizarse para controlar la citotoxicidad de la misma muestra a lo largo del tiempo. Para realizar el ensayo, se transfiere una alícuota del medio de cultivo celular a una placa nueva y se añade la mezcla de reacción. Tras una incubación de 10 minutos, la reacción se detiene cuando se añade la solución de parada y la fluorescencia se mide con un lector de microplacas.