Thermo Scientific™ BplI (5 U/μL)

Descripción

Las endonucleasas de restricción convencionales representan una gran colección de enzimas de restricción de alta calidad, optimizadas para funcionar en uno de los tampones del sistema de cinco tampones. Además, se proporciona el tampón universal Tango para mayor comodidad en digestiones dobles. Todas las enzimas muestran una actividad del 100 % en las condiciones de reacción y tampón recomendadas. Para garantizar uniformidad en el rendimiento, los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific contienen BSA previamente mezclada, lo que mejora la estabilidad de numerosas enzimas y fija sustancias contaminantes que pueden estar presentes en preparaciones de ADN.

5'...▵ ₈(N) G A G (N)₅ C T C (N)₁₃▵...3'

3'...▵₁₃(N) C T C (N)₅ G A G (N)₈ ▵...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• [1 tampón Tango™] + SAM: [33 mm de Tris-acetato (pH 7,9 a 37 °C), 10 mm de Mg-acetato, 66 mm de K-acetato y 0,1 mg/ml de BSA] + 0,05 mm de S-adenosilmetionina
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• BplI se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,4 a 25 °C), 100 mm de KCl, 1 mm de DTT, 1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 10 veces la cantidad de BplI, más del 70 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse, pero no se pueden recortar debido a la metilación de la secuencia de reconocimiento de esta enzima

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: puede solaparse, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: nunca se solapa, sin efecto.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 10 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Nota:

Bpll requiere solamente Mg² + para su actividad, pero es estimulado por S-adenosilmetionina. Con 0,05 mm de S-adenosilmetionina se obtiene una actividad más de 100 veces mayor de BplI. Aún así, es difícil conseguir una fragmentación completa de algunos sustratos con BplI. La concentración de BplI viene determinada por el nivel máximo de fragmentación que se alcanza cuando no se observa ningún cambio en el patrón de fragmentación aunque se emplee más enzima.