Invitrogen™ Kit de ELISA para IgA humana sin recubrimiento con placas

Descripción

El kit de ELISA de inmunoglobulina A (IgA) humana sin recubrimiento contiene pares de anticuerpos y reactivos previamente emparejados para realizar enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) para la cuantificación y detección de los niveles proteicos de igA humana. El tampón de lavado y la solución de parada son necesarios para completar la reacción ELISA y se venden por separado. Principio del método Los ELISA están diseñados para medir la cantidad del objetivo enlazado entre un par de anticuerpos iguales. Un anticuerpo específico del objetivo se recubre en el fondo de los pocillos de una microplaca, que es un proceso nocturno. A continuación, se agregan muestras, estándares o controles a estos pocillos y se unen al anticuerpo inmovilizado (captura). Se forma un sándwich mediante la adición del segundo anticuerpo (detector), se añade una solución de sustrato que reacciona con el complejo enzima-anticuerpo-objetivo para producir una señal cuantitativa. La intensidad de esta señal es directamente proporcional a la concentración del objetivo presente en la muestra original.

El isotipo de un anticuerpo primario y la aplicación en la que se está utilizando pueden dar lugar a la tinción de fondo. El ruido de fondo del anticuerpo primario puede ser causado por la unión a los receptores Fc en las células objetivo; por interacciones no específicas con proteínas celulares, carbohidratos y lípidos, o por autofluorescencia celular. Los anticuerpos de control de isotipo pueden actuar como controles negativos para ayudar a diferenciar la señal de fondo no específica de la señal de anticuerpo específica porque no tienen especificidad relevante para un antígeno diana. Si bien los controles de isotipo se usan con mayor frecuencia en citometría de flujo, son útiles en otras aplicaciones como la inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), la inmunohistoquímica y los cambios de geles. Los controles de isotipo deben coincidir con las especies de anticuerpos primarios y el isotipo para poder determinar con precisión el nivel de tinción específica del anticuerpo. Si se utilizan anticuerpos primarios marcados directamente, el control de isotipo funciona mejor si se conjuga con la misma etiqueta que el anticuerpo de prueba.