Invitrogen™ Image-iT™ LIVE Red and Green Caspase Apoptosis Detection Kits for microscopy

Descripción

Detecte y evalúe la activación de la caspasa, la permeabilidad de la membrana y el ciclo celular mediante los kits de detección de apoptosis de policaspasas y caspasas-3 y-7 de color rojo y verde Image-iT LIVE para microscopía, incluida la microscopía de fluorescencia y la detección de alto contenido (HCS). Los kits de detección de caspasas de color rojo y verde Image-iT LIVE utilizan la metodología de inhibidor fluorescente de caspasas (FLICA) para detectar la actividad de la caspasa, una medida de la apoptosis celular, e informar sobre ella. En concreto, los kits de detección de caspasas de color rojo y verde Image-iT LIVE contienen los sustratos SR-VAD-FMK y SR-DEVD-FMK (para fluorescencia roja), o FAM-VAD-FMK y FAM-DEVD-FMK (fluorescencia verde), para la detección de policaspasas y caspasa-3/7, respectivamente. También incluyen tinciones Hoechst 33342 y de yoduro de propidio, lo que permite la evaluación simultánea de la permeabilidad de la membrana y el ciclo celular mediante microscopía y HCS.

Los kits de detección de caspasas de color rojo y verde Image-iT LIVE para microscopía utilizan un nuevo enfoque para detectar caspasas activas: ambos kits de ensayo aprovechan una metodología de inhibidor fluorescente de las caspasas (FLICA), que es una etiqueta de afinidad. Este reactivo asocia una fracción de la fluorometilcetona (FMK) que puede reaccionar covalentemente con una cisteína, con una secuencia de aminoácidos específica de la caspasa. Se utilizan diferentes secuencias de reconocimiento de aminoácidos para detectar diferentes caspasas: ácido valina-alanina-aspártico (VAD) para las policaspasas (incluidas las caspasas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 y -9) y ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD) para caspasa-3/7. Se incluye un grupo de sulforhodamina (SR) o carboxifluoresceína (FAM) como indicador.

Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal rojo o verde fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de detección de policaspasas de color rojo, caspasa-3/7 de color rojo, policaspasas de color verde y caspasa-3/7 de color verde Image-iT LIVE son SR-VAD-FMK, SR-DEVD-FMK, FAM-VAD-FMK y FAM-DEVD-FMK, respectivamente.